標題：丙酮酸脫氫酶（PDH）檢測試劑盒

產品概述

丙酮酸脫氫酶(PDH)檢測試劑盒

需自備的儀器和用品

可見分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、1 mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制

試劑一：50mL×1瓶，-20℃保存；

試劑二：10mL×1瓶，-20℃保存；

試劑三：1mL×1支，-20℃保存；

試劑四：液體50mL×1瓶，4℃保存；

試劑五：粉劑×1支，4℃保存；

試劑六：粉劑×1支，4℃保存；

試劑七：粉劑×1支，4℃保存；

試劑八：粉劑×1支，4℃保存;

工作液的配制：臨用前把試劑五、試劑六、試劑七和試劑八轉移到試劑四中混合溶解待用。

 PDH的提取

1. 準確稱取0.1g組織或收集500萬細胞，加入1mL試劑一和10uL 試劑三，用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
2. 4 ℃ 600 g離心5min。
3. 將上清液移至另一離心管中，4 ℃ 11000 g離心10min。
4. 上清液即胞漿提取物，可用于測定從線粒體泄漏的PDH（此步可選做）。
5. 在沉淀中加入200uL試劑二和2uL 試劑三，超聲波破碎（功率20％，超聲3秒，間隔10秒，重復30次），用于PDH活性測定。

測定步驟

1. 調零

用蒸餾水于605nm處調零。

1. 樣本測定

（1）取900μL工作液加入1mL玻璃比色皿，在37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）中孵育5min。

（2）取出比色皿，加入50μL酶液，混勻；立即記錄605nm處初始吸光值A1，37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）中準確反應1min，記錄605nm處1min后的吸光值A2，計算ΔA=A1-A2。

注意事項

1、測定過程中所有試劑和樣本在冰上放置，以免變性和失活。

2、比色皿中反應液的溫度必須保持37℃或25℃，取小燒杯一只裝入一定量的37℃或25℃蒸餾水，將此燒杯放入37℃或25℃水浴鍋中。在反應過程中把比色皿連同反應液放在此燒杯中。

3、兩個人同時做此實驗，一個人比色，一個人計時，以保證實驗結果的準確性。

丙酮酸脫氫酶(PDH)檢測試劑盒