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01、心臟采血
雞右側(cè)臥自然保定,從膝關(guān)節(jié)稍前下方處垂直地面進(jìn)針采血。
要點(diǎn):
(1)采血前雞盡可能處于自然狀態(tài)。
(2)垂直地面進(jìn)針:刺入正確時(shí),松開注射器,會(huì)看到注射器隨心臟的自然跳動(dòng)。
(3)先把針全部刺入,如采不出,可以一邊向上提注射器,一邊采血,注意向上提注射器時(shí)速度要慢。
02、翅靜脈采血
(1)捏住近心端,讓翅靜脈臌起。
(2)針頭斜面向上,小角度刺入翅靜脈中,待出現(xiàn)回血時(shí),松開近心端,固定好針頭進(jìn)行采血即可。
雞紅細(xì)胞如何制備?
以1%雞紅細(xì)胞為例
把采集過動(dòng)物血液的采血管依次放入卡套內(nèi),并將放置于離心機(jī)對(duì)角線的兩個(gè)卡套配平,使其重量相同(相差不超過0.2g),低溫離心機(jī)4000r/min,離心10分鐘。離心機(jī)的使用參照離心機(jī)的操作規(guī)程。
1、清洗紅細(xì)胞
1.1于超凈臺(tái)內(nèi)采集上清液置于無菌血清瓶中即為血漿(不同的抗凝劑需做好標(biāo)記),-20℃冷凍保存于固定區(qū)域
1.2小心吸取紅細(xì)胞上方的白細(xì)胞層,并棄去。
1.3在每根吸除過白細(xì)胞的采血管中,加入和壓積紅細(xì)胞等體積的無菌1×PBS,并輕輕吹打混勻。
1.4將混勻好的紅細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)至15ml無菌離心管中,低溫離心機(jī)2000r/min離心10分鐘。
1.5吸取上清液并棄去。
1.6 加入和壓積紅細(xì)胞等體積的無菌1×PBS,并輕輕吹打混勻。低溫離心機(jī)2000r/min離心10分鐘。重復(fù)1.5-1.6步驟一次,吸取上清液并棄去即為紅細(xì)胞原液。
2、制作紅細(xì)胞懸液根據(jù)所需的紅細(xì)胞百分比濃度,在血清瓶中加適量2-8℃保存的阿氏液和紅細(xì)胞原液,制成1%的雞紅細(xì)胞懸液。
保存方法
(1%雞紅細(xì)胞保存條件:2-8℃,30天)
注意事項(xiàng):
· 注意不要凍融
· 每天需上下輕輕顛倒混勻
· 注意無菌操作
· 2-8℃保存,盡快使用
· 盡量避免劇烈震蕩
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