乳酸脫氫酶細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒使用原理及注意事項(xiàng)

產(chǎn)品名稱：乳酸脫氫酶細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒

英文名稱：LDH Cytotoxicity Assay Kit

產(chǎn)品規(guī)格：500T

儲(chǔ)存條件：-20℃

乳酸脫氫酶細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒(LDH Cytotoxicity Assay Kit)，也稱乳酸脫氫酶檢測(cè)試劑盒(LDH Assay Kit)或乳酸脫氫酶釋放檢測(cè)試劑盒(LDH Release Assay Kit)，是一種基于diaphorase催化的INT顯色反應(yīng)，通過比色法檢測(cè)細(xì)胞毒性時(shí)釋放的乳酸 脫氫酶活性或檢測(cè)其它樣品中的乳酸脫氫酶活性的試劑盒。

本試劑盒可以用于常規(guī)的乳酸脫氫酶活性的檢測(cè)，更常用于以LDH釋放為指標(biāo)的細(xì)胞毒性檢測(cè)。同時(shí)，基于細(xì)胞總?cè)樗崦摎涿富钚缘臋z測(cè)，本試劑盒也可以用于檢測(cè)細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性檢測(cè)。

細(xì)胞凋亡或壞死而造成的細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)的破壞會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞漿內(nèi)的酶釋放到培養(yǎng)液里，其中包括酶活性較為穩(wěn)定的乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase, LDH)。通過檢測(cè)從質(zhì)膜破裂的細(xì)胞中釋放到培養(yǎng)液中的LDH的活性，就可以實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞毒性的定量分析。LDH釋放被看做細(xì)胞膜完整性的重要指標(biāo)，并被廣泛用于細(xì)胞毒性檢測(cè)。LDH釋放被認(rèn)為是以前使用放射性的51Cr標(biāo)記細(xì)胞，隨后通過51Cr釋放進(jìn)行 細(xì)胞膜完整性檢測(cè)的安全有效的替代方法。

本試劑盒的基本原理是，在乳酸脫氫酶的作用下，NAD+被還原生成NADH，NADH和INT (2-p-iodophenyl-3-nitrophenyl tetrazolium chloride)被硫辛酰胺脫氫酶(diaphorase)催化反應(yīng)生成NAD+和強(qiáng)生色物甲臜(formazan)，在490nm波長下產(chǎn)生吸收峰，從而可以通過比色來定量乳酸脫氫酶的活性。吸光度與乳酸脫氫酶活性成線性正相關(guān)

注意事項(xiàng)：

1、冷凍會(huì)使樣品中部分乳酸脫氫酶失活，4℃可放置2-3天。建議樣品準(zhǔn)備好后盡量當(dāng)天完成測(cè)定。
2、如果檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)液中的乳酸脫氫酶，由于血清含有乳酸脫氫酶，建議血清的使用濃度不要超過1%，并最好使用熱滅活血清。如果一定需要使用10%血清，在檢測(cè)時(shí)一定要設(shè)置沒有細(xì)胞，但加入了相同體積培養(yǎng)液的對(duì)照孔，以用于消除背景。
3、細(xì)胞過度生長、密度過高、離心速度過大、培養(yǎng)箱內(nèi)外溫差過大，都會(huì)造成細(xì)胞釋放乳酸脫氫酶增加。
4、如果希望進(jìn)行乳酸脫氫酶活性的絕對(duì)定量，用戶需自備乳酸脫氫酶標(biāo)準(zhǔn)品。
5、為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
7、本產(chǎn)品僅供科研實(shí)驗(yàn)用，不做其它用途。不得存放于普通住宅內(nèi)