培養(yǎng)基配制過程各環(huán)節(jié)的要求

基本原理

正確掌握培養(yǎng)基的配制方法是從事微生物學(xué)實驗工作的重要基礎(chǔ)，由于微生物種類及代謝類型的多樣性，因而用于培養(yǎng)微生物培養(yǎng)基的種類也很多，它們的配方及配制方法雖各有差異。但一般培養(yǎng)基的配制程序卻大致相同，例如器皿的準(zhǔn)備，培養(yǎng)基的配制與分裝，棉塞的制作，培養(yǎng)基的滅菌，斜面與平板的制作以及培養(yǎng)基的無菌檢查等基本環(huán)節(jié)大致相向。

三、實驗材科

(一)藥品

待配各種培養(yǎng)的組成成分，瓊脂，1mol/L NaOH溶液，1mol/l (升，統(tǒng)一用大寫)HCl溶液。

(二)儀器

天平或臺秤，高壓蒸汽滅菌鍋。

(三)玻璃器皿

移液管、試管、燒杯、量筒、錐形瓶、培養(yǎng)皿、玻璃漏斗等。

(四)其他物品

藥匙、稱量紙、pH試紙、記號筆、棉花、紗布、線繩、塑料試管蓋、牛皮紙、報紙等。

四、實驗內(nèi)容

(一)玻璃器皿的洗滌和包裝

1．玻璃器皿的洗滌

玻璃器皿在使用前必須洗刷干凈。將錐形瓶、試管、培養(yǎng)皿、量筒等浸入含有洗滌劑的水中，用毛刷刷洗，然后用自來水及蒸餾水沖凈。移液管先用含有洗滌劑的水浸泡。再用自來水及蒸餾水沖洗，洗刷干凈的玻璃器皿置于烘箱中烘干后備用。

2．滅菌前玻璃器皿的包裝

(1)培養(yǎng)皿的包裝 培養(yǎng)皿由一蓋—底組成一套?？捎脠蠹垖滋着囵B(yǎng)皿包成一包，或者將幾套培養(yǎng)皿直接置于特制的鐵皮圓筒內(nèi)，加蓋滅菌。包裝后的培養(yǎng)皿須經(jīng)滅菌之后才能使用。

(2)移液管的包裝 在移液管的上端塞入—小段棉花(勿用脫脂棉)。它的作用是避免外界及口中雜菌吹入管內(nèi)，并防止菌液等吸入口中。塞入此小段棉花應(yīng)距管口約0.5cm左有。棉花自身長度約1~1.5cm。塞棉花時，可用一外圈拉直的曲別針，將少許棉花塞入管口內(nèi)。棉花要塞得松緊適宜，吹時以能通氣而又不使棉花滑下為準(zhǔn)。

先將報紙裁成寬約5cm左右的長紙條，然后將已塞好棉花的移液管放在長條報紙的一端，約成45度角，折疊紙條包住，用左手握住移液管身，右手將移液管壓緊，在桌面上向前搓轉(zhuǎn)，以螺旋式包扎起來。上端剩余紙條，折疊打結(jié)，準(zhǔn)備滅菌。

(二)液體及固體培養(yǎng)基的配制過程

1．液體培養(yǎng)基配制

(1)稱量一般可用1/100粗天平稱量配制培養(yǎng)基所需的各種藥品。先按培養(yǎng)基配方計算各成分的用量，然后進(jìn)行準(zhǔn)確稱量。

(2)溶化 將稱好的藥品置于一燒杯中，先加入少量水(根據(jù)實驗需要可用自來水或蒸餾水)，用玻棒攪動，加熱溶解。

(3)定容 待全部藥品溶解后，倒入一量筒中，加水至所需體積。如某種藥品用量太少時，可預(yù)先配成較濃溶液，然后按比例吸取一定體積溶液，加入至培養(yǎng)基中。

(4)調(diào)pH 一般用pH試紙測定培養(yǎng)基的pH。用剪刀剪出一小段pH試紙，然后用鑷子夾取此段pH試紙，在培養(yǎng)基中蘸一下，觀看其pH范圍，如培養(yǎng)基偏酸或偏堿時，可用1mol/l NaOH或1mol/l HCl溶液進(jìn)行調(diào)節(jié)。調(diào)節(jié)pH時，應(yīng)逐滴加入NaOH或HCl溶液，防止局部過酸或過堿，破壞培養(yǎng)基中成分。邊加邊攪拌，并不時用pH試紙測試，直至達(dá)到所需pH為止。

(5)過濾 用濾紙或多層紗布過濾培養(yǎng)基。一般無特殊要求時，此步可省去。

2．固體培養(yǎng)基的配制

配制固體培養(yǎng)基時，應(yīng)將已配好的液體培養(yǎng)基加熱煮沸，再將稱好的瓊脂(1．5％-2％)加入，并用玻棒不斷攪拌，以免糊底燒焦。繼續(xù)加熱至瓊脂全部融化，后補(bǔ)足因蒸發(fā)而失去水分。