億迅生物知識小課堂：正確預(yù)防細胞污染的錦囊妙計

大家都知道培養(yǎng)細胞時受到嚴重污染，有時候即使想盡各種辦法也難以挽回。因此，防止污染，預(yù)防是關(guān)鍵。只有將預(yù)防措施貫穿于整個細胞培養(yǎng)的始終，才能將發(fā)生污染的可能性降低。

億迅生物為大家分享如何正確預(yù)防細胞污染應(yīng)該從以下幾方面著手：（僅供參考）

（1）添加抗生素

各種抗生素性質(zhì)不同，對各種微生物的作用也不同，聯(lián)合應(yīng)用比單用效果好，預(yù)防性應(yīng)用比污染后使用好（但迄今尚無對抗支原體抗生素）。但反復(fù)使用抗生素會使微生物產(chǎn)生耐藥性，且對細胞本身也有一定影響，因此為避免誘導(dǎo)抗藥細菌，應(yīng)定期更換培養(yǎng)系統(tǒng)中的抗生素，或盡可能不用抗生素處理。

（2）從物品、用品消毒滅菌著手

細胞培養(yǎng)所用物品清洗、消毒要*，各種溶液滅菌除菌要仔細，并在取樣檢菌一周后確認無菌才能使用。同時，在無菌過濾操作中，隨著濾過體積的增大，濾膜破損的可能性增加，故應(yīng)選擇后過濾的液體進行檢測。定期對二氧化碳培養(yǎng)箱進行消毒。具體操作：75%的酒精搽拭培養(yǎng)箱后，使用可移動的紫外燈至少消毒30min，加入高壓滅菌過的超純水于培養(yǎng)箱水槽中保持濕度。也可配制300ml 的飽和硫酸銅加3L 滅菌超純水混合成硫酸銅溶液加入水槽中。

（3）從操作者做起

①進無菌室前要*洗手，按規(guī)定穿隔離衣。開始操作前要用 75%酒精棉球擦手、擦瓶口和燒灼瓶口。

②操作者動作要輕，安裝吸管帽、打開或封閉瓶口等操作應(yīng)在火焰近處并經(jīng)過燒灼進行。但要注意，金屬器械不能在火焰中長時間燒灼，以防退火；燒過的器械要冷卻后才能使用；已吸過培養(yǎng)液的吸管不能再用火焰燒灼，因殘留在吸管內(nèi)的培養(yǎng)液成分如蛋白質(zhì)等燒焦后會產(chǎn)生有害物質(zhì)，吸管再用時會將其帶到培養(yǎng)液中；膠塞、橡皮及塑料的細胞培養(yǎng)用品過火焰是也不能時間太長，以免燒焦產(chǎn)生有害氣體，危害培養(yǎng)細胞，同時塑料細胞培養(yǎng)用品也會產(chǎn)生變形影響使用。

③使用培養(yǎng)液前不宜過早開瓶，開瓶后的培養(yǎng)液應(yīng)保持斜位，避免直立，以防止下落細菌的污染。不再使用的培養(yǎng)液應(yīng)立即封閉瓶口，培養(yǎng)的細胞在處理之前勿過早暴露在空氣中。

④操作時盡量不要談話，咳嗽以防止來自唾沫和呼出的氣流所造成的污染。

⑤吸取培養(yǎng)液、細胞懸液時，應(yīng)專管，一旦發(fā)現(xiàn)吸管口接觸了手和其他污染物品應(yīng)棄去，以防止污染擴大或造成培養(yǎng)物之間的交叉污染。

⑥操作完畢后應(yīng)整理好工作臺面，用消毒水浸泡的紗布擦拭臺面。

（4）防止細胞交叉污染

所有從別處轉(zhuǎn)來的或是自己所建的細胞系都要早期留有的充足的凍存儲備，一旦懷疑發(fā)生交叉污染，可做細胞遺傳學(xué)方面的鑒定，如發(fā)現(xiàn)原有的細胞遺傳物發(fā)生改變，可以復(fù)蘇早期凍存的細胞使用。重要細胞系（株）的傳代工作應(yīng)由兩人獨立進行。

（5）無菌室的*消毒

①酒精全面*擦洗無菌室。使用前應(yīng)稀釋即配即用。

②甲醛熏蒸法：甲醛是一種廣譜滅菌劑菌，其水溶液和氣體對各種細菌、芽孢及真菌等微生物均有殺滅作用。甲醛價廉，熏蒸消毒時不損壞衣服、家具、皮革、橡膠等。市售的甲醛水溶液中一般含37－40%的甲醛。

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