標(biāo)題：HRP標(biāo)記的兔抗人IgM

產(chǎn)品概述

HRP標(biāo)記的兔抗人IgM

重要提示：

本產(chǎn)品僅用于研究用途，不用于人類、治療或診斷應(yīng)用。

HRP標(biāo)記的兔抗人IgM

一、戊二醛二步HRP標(biāo)記法

1. 原理

戊二醛為一種雙功能試劑，通過其醛基分別與酶和免疫球蛋白上的氨基共價(jià)結(jié)合，形成酶-戊二醛-免疫球蛋白結(jié)合物。

2. 標(biāo)記步驟

（1）稱取HRP25mg溶于1.25%戊二醛溶液中，于室溫靜置過夜。

（2）反應(yīng)后的酶溶液經(jīng)Sephadex G-25層析柱，用生理鹽水洗脫。流速控制在1ml/1分鐘，收集棕色流出液。如體積大于5ml，則以PEG濃縮至5ml。放置25ml小燒杯中，緩慢攪拌。

（3）將待標(biāo)記的抗體12.5mg用生理鹽水稀釋至5ml，攪拌下逐滴加入酶溶液中。

（4）用1M PH9.5碳酸緩沖液0.25ml，繼續(xù)攪拌3小時(shí)。

（5）加0.2M賴氨酸0.25ml，混勻后，置室溫2小時(shí)。

（6）在攪拌下逐滴加入等體積飽和硫酸銨，置4℃ 1小時(shí)。

（7）3000rpm離心半小時(shí)，棄上清。沉淀物用半飽和硫酸銨洗二次，zui后沉淀物溶于少量0.15M PH7.4的PBS中。

（8）將上述溶液裝入透析袋中，對(duì)0.15M PH7.4的PBS緩沖鹽水透析，去除銨離子后(用萘氏試劑檢測(cè))，10,000rpm離心30分鐘去除沉淀，上清液即為酶結(jié)合物，分裝后，冰凍保存。