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描述:測(cè)定意義:THL(EC 3.2.1.28)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中。海藻糖酶主要功能在于生物體分解海藻糖生成葡萄糖而直接用于能量供應(yīng)。測(cè)定原理:采用3.5-二硝基水楊酸法測(cè)定THL催化海藻糖產(chǎn)生的還原糖的含量。還原糖與3.5-二硝基水楊酸共熱生成棕紅色的氨基化合物,在一定范圍內(nèi)還原糖的量和反應(yīng)液的顏色深度成正比,由此判斷THL活性的高低。海藻糖酶檢測(cè)試劑盒
標(biāo)題:海藻糖酶檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品概述
海藻糖酶檢測(cè)試劑盒
需自備的儀器和用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;
試劑一:液體20mL×1瓶,4℃保存;
試劑二:粉劑×1瓶 ,4℃保存,用時(shí)加入2.5mL試劑一,充分溶解,現(xiàn)配先用;
試劑三:液體20mL×1瓶,4℃保存;
試劑四:液體20mL×1瓶,常溫保存;
樣品測(cè)定的準(zhǔn)備:
1、細(xì)菌或細(xì)胞:收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照每400萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液充分勻漿以破碎并裂解細(xì)胞(功率20%,超聲3S秒,間隔10S,重復(fù)30次);8000g,4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。
2、組織:稱(chēng)取約0.1g組織加入1mL提取液,冰浴中勻漿。8000g ,4℃下離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。
加樣表和測(cè)定步驟(在1.5mLEP管中依次加入下列試劑):
試劑名稱(chēng)(μL) | 對(duì)照管 | 測(cè)定管 |
樣本 | 180 | 180 |
試劑一 | 300 | 220 |
試劑二 |
| 80 |
37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)水浴,準(zhǔn)確反應(yīng)時(shí)間10min
試劑三 | 400 | 400 |
試劑四 | 400 | 400 |
混勻, 100℃煮沸5min(蓋緊,以防止水分散失),冷卻后,對(duì)照管調(diào)零,測(cè)定550nm處測(cè)定管吸光值。
海藻糖酶檢測(cè)試劑盒
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