標(biāo)題：NAD-蘋果酸脫氫酶（NAD-MDH）檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品概述

NAD-蘋果酸脫氫酶(NAD-MDH)檢測(cè)試劑盒

測(cè)定意義：

MDH （EC 1.1.1.37）廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，線粒體中MDH是TCA循環(huán)的關(guān)鍵酶之一，催化蘋果酸形成草酰乙酸；相反，胞漿中MDH催化草酰乙酸形成蘋果酸。草酰乙酸是重要的中間產(chǎn)物， 連接多條重要的代謝途徑。因此，MDH在細(xì)胞多種生理活動(dòng)中扮演著重要的角色，包括線粒體的能量代謝、 蘋果酸-天冬氨酸穿梭系統(tǒng)、活性氧代謝和抗病性等。根據(jù)不同的輔酶特異性，MDH分為NAD-依賴的MDH和NADP-依賴的MDH，細(xì)菌中通常只含有NAD-MDH，在真核細(xì)胞中，NAD-MDH分布于細(xì)胞質(zhì)和線粒體中。

測(cè)定原理：
NAD-MDH催化NADH還原草酰乙酸生成蘋果酸，導(dǎo)致340nm處光吸收下降。

需自備的儀器和用品：

紫外分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1 mL石英比色皿和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

試劑一、提取液60 mL×1瓶，在4℃保存；

試劑二、液體50 mL×1瓶，在4℃保存；

試劑三、粉劑×2支，-20℃保存；臨用前加入300μL雙蒸水，用不完的試劑仍-20℃保存；

試劑四、粉劑×2支，-20℃保存；臨用前加入300μL雙蒸水，用不完的試劑仍-20℃保存。

樣本測(cè)定的準(zhǔn)備：

1、 細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備 ：

細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，棄上清，按照每200萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入400μL提取液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（功率20％，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次），8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。

組織：稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一進(jìn)行冰浴勻漿；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。

2、血清（漿）樣品：直接檢測(cè)。

測(cè)定操作表：

將上述試劑按順序加入1 mL石英比色皿中，混勻后在37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其它物種），340 nm波長(zhǎng)下記錄初始吸光度A1和反應(yīng)1min后的吸光度A2，計(jì)算ΔA=A1-A2。

注意事項(xiàng)：

1、粗酶液的提取必須在0℃ - 4℃中操做完成，以防止酶變性失活。

2、實(shí)驗(yàn)時(shí)，試劑三、試劑四和樣本在冰上放置，以免變性和失活。試劑二37℃或25℃室溫放置。

NAD-蘋果酸脫氫酶(NAD-MDH)檢測(cè)試劑盒