標(biāo)題：ADPG焦磷酸化酶（AGP）檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品概述

ADPG焦磷酸化酶(AGP)檢測(cè)試劑盒

需自備的的儀器和用品

紫外分光光度計(jì)、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水

試劑的組成和配制

提取液：液體60mL×1瓶，4℃保存;

試劑一：液體20mL×1瓶，4℃保存；

試劑二：粉劑×2支，4℃保存；臨用前每支加入250μL雙蒸水充分溶解備用；用不完的試劑仍4℃保存；

試劑三：粉劑×1瓶，4℃保存；臨用前加入3mL雙蒸水充分溶解備用；用不完的試劑仍4℃保存；

試劑四：粉劑×2瓶，4℃保存；臨用前每瓶加入3mL雙蒸水充分溶解備用；用不完的試劑仍4℃保存；

試劑五：粉劑×2瓶，-20℃保存；臨用前每瓶加入3mL雙蒸水充分溶解備用；用不完的試劑仍-20℃保存；

試劑六：粉劑×2支，-20℃保存；臨用前每支加入250μL雙蒸水充分溶解備用；用不完的試劑4℃保存；

試劑七：粉劑×2支，-20℃保存；臨用前每支加入250μL雙蒸水充分溶解備用；用不完的試劑4℃保存；

粗酶液制備

稱取約0.1g組織加入1mL提取液，冰浴中勻漿。10000g ，4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。

測(cè)定步驟

混勻，30℃保溫15 min，置沸水浴中1 min（蓋緊，防止水分散失），冰浴迅速冷卻

混勻后立即在340 nm波長(zhǎng)下記錄初始吸光度A1和 2min后的吸光度A2，計(jì)算ΔA=A2-A1。

AGP活性計(jì)算

1、按樣本蛋白濃度計(jì)算：

單位的定義：每mg組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生1nmol NADPH定義為一個(gè)酶活性單位。

AGP活性（U/mg prot）＝反應(yīng)總體積（700μL ）÷樣本體積（20μL ）÷反應(yīng)時(shí)間(2min)÷NADPH消光系數(shù)（6.22×10^-3）×ΔA÷蛋白質(zhì)濃度（mg/mL）=2813×ΔA÷蛋白質(zhì)濃度（mg/mL）。

此法需要自行測(cè)定粗酶液蛋白質(zhì)濃度。

2、按照樣本鮮重計(jì)算

單位的定義：每g組織在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生1nmol NADPH定義為一個(gè)酶活力單位。

AGP活性（U/g 鮮重）=反應(yīng)總體積（700μL ）÷樣本體積（20μL ）÷反應(yīng)時(shí)間(2min)÷NADPH消光系數(shù)（6.22×10^-3）×ΔA ÷樣本鮮重(g/mL) =2813×ΔA÷樣本鮮重(g/mL)

ADPG焦磷酸化酶(AGP)檢測(cè)試劑盒