γ-谷氨酰半胱氨酸連接酶(GCL) 活性測(cè)試盒的測(cè)定步驟

( Glutamate Cysteine Ligase 分光光度法 50 T/48 樣)

一、測(cè)定原理：

在ATP和Mg2*存在下，GCL催化谷氨酸和半胱氨酸合成y-谷氨酷半胱氨酸:同時(shí)ATP分解產(chǎn)生無(wú)機(jī)磷，通過(guò)測(cè)定無(wú)機(jī)磷增加速率，即可計(jì)算出GCL活性。

二、自備儀器用品:

低溫離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)、水浴鍋、1L玻璃比色皿、濃硫酸、蒸餾水

三、試劑組成和配制:

試劑一:液體x1 瓶，4C保存:

試劑二:粉劑x1 瓶，4保存，臨用前加14mL蒸餾水充分震蕩溶解:

試劑三:粉劑x1 瓶，4保存，臨用前加3.5mL蒸留水充分震蕩溶解:

試劑四:液體x1 瓶，室溫保存:

試劑五: 粉劑x1 瓶，4保存，臨用前加30mL蒸餾水充分震蕩溶解，緩緩加入1.0mL濃硫酸，邊加邊攪拌。

四、樣品前處理:

樣本粗酶液提取詳見(jiàn)說(shuō)明書。測(cè)定組織和細(xì)胞同時(shí)需要測(cè)定蛋白濃度。可用本所的 A045-2 總蛋白定量測(cè)試盒(考馬斯亮法或者 A045-3、A0454 總試盒(BCA )進(jìn)蛋度的測(cè)定。

六、GCL測(cè)定步驟

1.分光光度計(jì)預(yù)熱30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到660nm，用蒸餾水調(diào)零；

2.空白管:

γ-谷氨酰半胱氨酸連接酶(GCL) 活性測(cè)試盒的測(cè)定步驟