動(dòng)物組織/細(xì)胞基因組 DNA 提取試劑盒實(shí)驗(yàn)原理

本試劑盒采用可以特異性結(jié)合 DNA 的離心吸附柱和*的緩沖液系統(tǒng)，提取組織和細(xì)胞的基因組 DNA。

離心吸附柱中采用的硅基質(zhì)材料為本公司*新型材料，能夠高效、專(zhuān)一吸附 DNA，可大限度去除雜質(zhì)蛋白

及細(xì)胞中其他有機(jī)化合物。 提取的基因組 DNA 片段大，純度高，質(zhì)量穩(wěn)定可靠。使用本試劑盒提取的基因組

DNA 可用于各種常規(guī)操作，包括酶切、 PCR、文庫(kù)構(gòu)建、Southern 雜交等實(shí)驗(yàn)。

操作步驟： 

使用前請(qǐng)先在漂洗液中加入無(wú)水乙醇，加入休積請(qǐng)參照瓶體上的標(biāo)簽。所有離心步驟均為使用臺(tái)式離心機(jī)

在室溫下離心。 

1、樣品的處理： a、細(xì)胞：取 1×106-1×107 個(gè)懸浮培養(yǎng)細(xì)胞，12000rpm 離心 1min 收集細(xì)胞，貼壁細(xì)胞先用胰蛋白酶消化處

理，再用預(yù)冷的 PBS 吹打成細(xì)胞懸液，然后 12000rpm 離心 1min 收集細(xì)胞，盡量除去上清，加 200ul 溶液 A，

振蕩至*混勻。

b、組織：組織量不宜過(guò)大，一般不要超過(guò) 25mg，可以使用勻漿器勻漿，好用液氮研磨成粉末狀，再用

預(yù)冷的 PBS 或無(wú)菌水充分懸浮，然后 12000rpm 離心 1min 收集細(xì)胞，盡量除去上清，加 200ul 溶液 A，振蕩至

*混勻。

2、向懸浮液中加入 20ul 的 RNase A (10mg/ml)，55℃放置 15min。 

3、加入 20ul 的蛋白酶 K( 10mg /ml )，充分顛倒混勻，55℃水浴消化，細(xì)胞消化時(shí)間較短，組織消化時(shí)間較長(zhǎng)，

一般需要 1-3 個(gè)小時(shí)才能完成（鼠尾需要消化過(guò)夜）。消化期間可顛倒離心管混勻數(shù)次，直至樣品消化*為止。

消化*的指標(biāo)是：液體清亮及粘稠。

4、加入 200ul 體積溶液 B，充分顛倒混勻，如出現(xiàn)白色沉淀，可放置于 75℃ 15-30min，沉淀即會(huì)消失，不影

響后續(xù)實(shí)驗(yàn)。如溶液未變清亮，說(shuō)明樣品消化不*，可能導(dǎo)致提取的 DNA 量少及不純，還有可能導(dǎo)致堵塞

吸附柱。

注意事項(xiàng): 

1、試劑盒拆封后，RNase A和蛋白酶K需放置-20℃保存。

2、樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融，否則會(huì)導(dǎo)致提取的DN片段較小且提取量也下降。

3、如果試劑盒中的溶液出現(xiàn)沉淀，可在65℃水浴中重新溶解后再使用，不影響效果。

4、洗脫緩沖液的體積好不少于50ul，體積過(guò)小會(huì)影響回收效率：洗脫液的pH值對(duì)洗脫效率也有影響，若需要

用水做洗脫液應(yīng)保證其pH值在8.0左右(可用NaOH將水的pH值調(diào)至此范圍)，pH 值低于7.0會(huì)降低洗脫效率