顯色基質(zhì)鱟試劑盒新品推薦

顯色基質(zhì)鱟試劑 ( Chromogenic End-point Tachypleus Amebocyte Lysate , CE TAL )用于體外細菌內(nèi)毒素的定量檢測，禁止以任何途徑進入機體。

【原理】鱟試劑為鱟科動物東方鱟的血液變形細胞溶解物的冷凍干燥品,鱟試劑中含有Ｃ因子、Ｂ因子、凝固酶原、凝固蛋白原等。在適宜的條件下（溫度，pH 值及無干擾物質(zhì)），細菌內(nèi)毒素激活 C 因子，引起一系列酶促反應(yīng)，激活凝固酶原形成凝固酶，凝固酶分解人工合成的顯色基質(zhì)，使其分解為多肽和黃色的對硝基苯胺（pNA，λmax = 405nm） 。在一定時間內(nèi)，pNA 的 生成量與細菌內(nèi)毒素濃度成正關(guān)，據(jù)此，可以定量供試品的內(nèi)毒素濃度。同時，對硝基苯胺（pNA）也可用偶氮化試劑染成玫瑰紅色（λmax = 545nm），避免了供試品本身的顏色對 405nm 處吸收峰的干擾。

鱟試劑：按標示量加細菌內(nèi)毒素檢查用水于鱟試劑中，輕輕振搖使鱟試劑*溶解, 注意不要用旋渦混勻儀激烈振搖。溶解的鱟試劑應(yīng)在 10 分鐘內(nèi)用完。 顯色基質(zhì)：按標示量加細菌內(nèi)毒素檢查用水于顯色基質(zhì)中，輕輕振搖使顯色基質(zhì)*溶解。顯色基質(zhì)溶液可在無污染的條件下于 4 ºC 貯存 8 小時以內(nèi)。

偶氮化試劑 1：按標示量加反應(yīng)終止劑鹽酸于偶氮化試劑 1 中，
偶氮化試劑 2：按標示量加細菌內(nèi)毒素檢查用水于偶氮化試劑 2 中，
偶氮化試劑 3：按標示量加細菌內(nèi)毒素檢查用水于偶氮化試劑 3 中，
偶氮化試劑溶液可于 4ºC 貯存 1 周。 3.4 實驗操作 取無熱原試管，加入 100μl 細菌內(nèi)毒素檢查用水、內(nèi)毒素標準溶液，或供試品。再加入 100μl 鱟試劑溶液，混勻，37ºC 溫育 T1分鐘。 溫育結(jié)束，加入 100μl 顯色基質(zhì)溶液，混勻，37ºC 溫育 T2分鐘。 溫育結(jié)束，加入 500μl 偶氮化試劑 1 溶液，混勻， 加入 500μl 偶氮化試劑 2 溶液，混勻 加入 500μl 偶氮化試劑 3 溶液，混勻，靜置 5 分鐘，于 545nm 波長處讀取吸光度值。

【供試品的干擾試驗】 供試品的干擾試驗詳見《中華人民共和國藥典》2005 版中《細菌內(nèi)毒素檢查法》的 “光度測定法干擾試驗”。

當鱟試劑、供試品的來源、配方、生產(chǎn)工藝改變或試驗環(huán)境中發(fā)生了任何有可能影響試驗結(jié)果的變化時，須進行干擾試驗,步驟如下: 
1 選擇標準曲線中點或一個靠近中點的內(nèi)毒素濃度（設(shè)為 λm），作為供試品干擾試驗中添加的內(nèi)毒素濃度，配制含 λm 內(nèi)毒素的供試品陽性對照，測量出該溶液的內(nèi)毒素濃度,稱為 Cs；
2 測量出未添加外源內(nèi)毒素的供試品溶液內(nèi)毒素濃度,稱為 Ct；
3 計算該試驗條件下的回收率 R＝（Cs–Ct）/λm×100
4 當 R 在 50%～200%之間，則認為在此試驗條件下供試品溶液不存在干擾作用。
5 當 R 在 50%～200%之外，需對供試品進行系列稀釋(稀釋倍數(shù)不得超過有效稀釋倍數(shù) MVD)或進行其它處理消除干擾,每一稀釋溶液都重復步驟 1-3,直到內(nèi)毒素的回收率 R 在 50%～200%之間。選擇回收率 R 接近 100的稀釋倍數(shù)進行內(nèi)毒素檢測。